## Technique de séparation

### Analyse quantitative par HPLC-UV-MS

Pour réaliser cette étude par méthode HPLC, on utilise un spectromètre LC avec :

• une colonne Kinetex 1.7mm 50x2.1 mm Phenomenex (Torrance, CA, USA) .

• un flux de 0.6 ml/min de volume d'injection était de 10µL.

• les solvants d'élution sont : A H2O + 0.1% HCOOH.

B AcCN + 0.1% HCOOH.

• Les séparations ont été réalisées à température ambiante par un gradient d'élution du solvant

Les gradients des solvants d'élution
Le temps | A% | B%
0 | 98 | 0.2
5 | 87 | 13
13 | 82 | 18
25 | 50 | 50

Aprés chaque injection , la colonne a été lavée par AcCN + 0.1% HCOOH (98%) pendant 4 min et re-équilibrer (5 min).

Conditions MS : LTQ Orbitrap (ThermoElectron Corporation) , équipé d'une interface ESI. La source ESI a été opérée en mode ion- négatif. L'azote de haute pureté (N2) a été utilisé à la fois comme gaz de séchage et de gaz nébulisant, et hélium pur (He) comme le gaz de collision. Les paramètres de fonctionnement ont été optimisés comme suit: tension de source 4 kV, tension capillaire -50 V, tension de tube -131,47 V, température capillaire 280 ºC, enveloppe et débit de gaz auxiliaire (N2) 30 e 10 (unités arbitrales).